Stage mevr. R. Jansen | parkinson-vereniging.nl

A A
Meer

Stage mevr. R. Jansen

Stageverslag Renate Jansen

Gepubliceerd op 4 augustus 2016

Als onderdeel van de master Molecular Life Sciences aan de Universiteit van Wageningen, vertrok ik eind augustus 2015 naar Oxford voor een stage van tien maanden bij de Molecular Neurodegeneration onderzoeksgroep van Dr. George Tofaris. Zij onderzoeken moleculaire mechanismen die een rol spelen bij de ziekte van Parkinson, met name naar mechanismen die betrokken zijn bij eiwitafbraak. 

Introductie

Bij de ziekte van Parkinson hopen zich namelijk bepaalde eiwitten op in een deel van de hersencellen en vormen zogeheten Lewy Bodies. Eén van de eiwitten die daarin het meeste voorkomt is alpha-synucleïne. Steeds meer onderzoek suggereert dat geaggregeerd (samengeklonterd) alpha-synucleïne zich van cel tot cel kan verspreiden en zo steeds meer eiwitophopingen kan veroorzaken. Recentelijk is er een methode ontwikkeld om dit proces na te bootsen. Hierbij wordt gebruik gemaakt van “pre-formed alpha-synuclein fibrils” (PFFs). Wanneer PFFs aan cellen worden toegevoegd, wordt een deel hiervan opgenomen door de cellen, waar het vervolgens aggregeert met endogeen alpha-synucleïne.

Eiwitten kunnen via verschillende mechanismen worden afgebroken en dit kan zowel specifiek als aspecifiek gebeuren. Bij het specifiek afbreken van eiwitten speelt ubiquitine een grote rol, wat werkt als een soort label: ubiquitine kan op veel verschillende manieren aan eiwitten worden vastgemaakt en bepaalt op deze manier via welke weg een eiwit wordt afgebroken. Dubiquitinase enzymen kunnen deze ubiquitine-labels weer van een eiwit verwijderen.

Tijdens dit onderzoeksproject is gekeken naar wat er gebeurt met de hoeveelheid opgehoopt alpha-synucleïne wanneer een bepaald deubiquitinase enzym wordt onderdrukt. Het idee daarachter was dat als er minder van dit enzym aanwezig is, er meer eiwitten zoals alpha-synucleïne gelabeld zijn of blijven met ubiquitine en richting eiwitafbraak worden gestuurd. Op die manier zou mogelijk meer alpha-synucleïne worden afgebroken, wat kan leiden tot een vermindering van de hoeveelheid opgehoopt alpha-synucleïne.

Methodes

Voor dit project werd de PFF methode gebruikt in SH-SY5Y cellen, een veelgebruikte cellijn in neurononderzoek. De cellen waren zo gemodificeerd dat ze een gemuteerde vorm van alpha-synucleine (A53T) tot overexpressie brachten. Deze gemuteerde vorm veroorzaakt bij mensen een erfelijke variant van de ziekte van Parkinson. De hoeveelheid van het deubiquitinase enzym werd door middel van een techniek genaamd “RNA interference” sterk verminderd, wat ook wel knockdown wordt genoemd.

Resultaten en conclusie

Tijdens dit project konden we helaas onze hypothese niet bevestigen. De eerste resultaten lieten zien dat knockdown van de deubiquitinase juist het aantal alpha-synucleïne ophopingen vergrootte in plaats van verminderde. Daarnaast suggereerden de experimenten dat de knockdown invloed had op selectieve autofagie, een van de mechanismen die samengeklonterd alpha-synucleïne afbreken. Of dit mechanisme juist actiever of minder actief werd, kan nog niet met zekerheid geconcludeerd worden. Hiervoor zijn verdere experimenten nodig.

Projectnummer: 2015-10S


Op het gebruik van deze website zijn de gebruiksvoorwaarden van toepassing.
Door het gebruik van de website of het forum gaat u akkoord met de toepasselijkheid van deze voorwaarden. 
Privacy- en cookiepolicy | Opzeggen lidmaatschap